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Descarga en pdf INTRODUCCIÓN
La inseminación artificial en canarios no será una técnica mayoritaria en un futuro, o al menos eso creo, pero nos brindará una alternativa para solucionar problemas que con la inseminación natural, a través de la cópula entre macho y hembra, no somos capaces de hacerlo. Por ejemplo, en aquellas parejas incompatibles socialmente, porque se pelean constantemente, no copulan, pero que sería muy interesante realizar ese cruce por su gran aporte genético. Los datos y fotografías que muestro en este artículo son de canarios de Canto Español Discontinuo, raza de canto reconocida por Confederación Ornitológica Española (COE) en 2010, pero que entiendo que son válidos para el resto de canarios, o al menos para la mayoría de ellos. No soy científico, aunque si un poco aficionado a la ciencia, a la que, de vez en cuando, me dedico, entre otras cosas, en mis ratos libres. No obstante, la mayoría de mi tiempo libre se lo dedico a los pájaros de canto y a lo que rodea a estos. INSEMINACIÓN ARTIFICIAL EN CANARIOS OBJETIVO CUMPLIDO
Empecé el trabajo para lograr la inseminación artificial en canarios en el año 2012, sin apenas información. Tenía que conseguir extraer semen a un canario macho e introducirlo en la vagina de la hembra. Quería documentar el proceso lo mejor posible. Pero se me presentaban varias incógnitas. ¿Cómo saber si he obtenido semen y no orina y heces? ¿Qué aspecto tenía un espermatozoide? ¿Qué tamaño tenía un espermatozoide? ¿Sería adecuado mi microscopio o necesitaba otro microscopio con más aumentos para verlo? Había visto algunos
vídeos que nos muestran cómo extraer el semen al macho y posteriormente
inseminar, pero la rigurosidad del proceso dejaba mucho que desear. No
aportaban comentarios de que dicha inseminación diese como resultado huevos
fecundados, al menos los que yo he podido ver. Sólo uno de esos videos, que
podemos ver en YouTube, el autor nos cuenta en los comentarios que la
inseminación no fue positiva. Lo único que había conseguido utilizando estas
técnicas que vi en los videos ha sido hacer daño al macho.
Así que, tomé como base la información que había obtenido sobre la inseminación en gallinas, que no me dejaba dudas de su rigurosidad. El primero objetivo, era obtener una muestra en la que se pudiese ver espermatozoides. Para ello, buscaba pequeñas células que se desplazasen moviendo la cola o flagelo. Pues eso hice durante la temporada de cría de 2012, sin llegar a ver ninguna célula de ese tipo, incluso probando con una lente en el microscopio de x100. En el año 2013, encuentro un artículo del año 1975 publicado en la revista “Pájaros”, escrito por Alfonso Babra, que habla del tema, pero tampoco me aporta mucho a mi búsqueda de espermatozoides. Casi finalizada la temporada de cría de 2013, sin mucha
fortuna en la búsqueda, me encuentro con el trabajo del Dr. Griñan, que habla de inseminación artificial en
canarios obteniendo los espermatozoides a través de cirugía endoscópica. En ese
trabajo, expone algunas fotos de los espermatozoides. Ver imagen 1.
Para mí fue una
gran alegría, jamás había visto un espermatozoide de canario, pero ahora ya
sabía lo que buscaba, no sabía su tamaño, pero al menos tenía una buena pista a
seguir.
Con la temporada de
cría prácticamente terminada, para intentar ver un espermatozoide lo que hice fue meter a un macho con la
hembra, esperar la cópula, y obtener una muestra de los fluidos de ambos
pájaros para ver si esas muestras contenían espermatozoides. Esto es lo que encontré,
ver imagen 2.
En la temporada de cría de 2014 retomé la búsqueda de espermatozoides vivos basándome en las fotos del Dr. Grinán. Pero los espermatozoides que buscaba no aparecían. Hasta que un día un buen me pone en contacto con Agustín, un veterinario jubilado, que había trabajado en la inseminación de canarios, quién me orienta sobre cómo se presentan los espermatozoides y me advierte de que son diferentes a los de los mamíferos. Toda mi búsqueda da un vuelco, porque recuerdo haber visto unas células como me describió Agustín, pero que en su día di por hecho que eran células presentes en las heces, y no espermatozoides, al no utilizar el flagelo para moverse. A finales de la temporada de cría 2014, puedo confirmar que he obtenido espermatozoides. Realizo varias recolecciones de semen y en la mayoría de las muestras allí estaban presentes, por lo que, en ese momento, considero que la técnica de recolección es adecuada y funcional. Ver imagen 3.
¿Pero
entonces los espermatozoides que muestran las fotografías del Dr. Griñán no son
espermatozoides? Si, lo son.
MATERIAL UTILIZADO
Este es el material
que yo he utilizado para realizar todo el proceso de inseminación. Pero podemos
utilizar otros materiales que nos permitan realizar la misma función. Aunque
durante estos años de pruebas he probado con otros materiales, estos son los
que considero más adecuados teniendo en cuenta su bajo coste económico.
Pipeta de Pasteur: Podemos utilizar las de vidrio o las de
plástico de punta fina. Si utilizamos las de vidrio, debemos reducir la sección
de la punta para una mejor recolección del semen, y acoplarle una tetina que
perforaremos nosotros mismos de forma sencilla. En el siguiente vídeo muestro como
reducir la sección de la pipeta. Si utilizamos las de plástico de punta fina no
es necesario realizar ninguna modificación, porque ya viene con tetina
incorporada que debemos perforar. Las pipetas se pueden reutilizar, pero es
necesario limpieza adecuada. La pipeta de vidrio es más duradera, ya que
soporta la limpieza muy bien. La de plástico de punta fina, no es tan duradera
porque la punta es flexible y se deteriora con las limpiezas.
Microscopio: Para ver la calidad del semen es necesario
un microscopio. Un microscopio sencillo, de los que se utilizan para uso
educativo es suficiente para ver los espermatozoides. Este tipo de microscopios
suelen venir con lentes de X10 o X16 en el visor, y 4x, 10x y 40x en el
revólver.
Aunque que algunas de las imágenes que veréis en este artículo están obtenidas con un microscopio NIKON Mod. Eclipse E400 que cuenta con contraste de fases. La mayoría de las imágenes fueron obtenidas con un microscopio Bresser Biolux NV.
Cámara de Neubauer: Para determinar el tamaño de los espermatozoides he utilizado una cámara de Neubauer, que tiene sectores micrométricos que nos permite obtener una referencia métrica bajo el microscopio.
Paciencia: Debemos conservar la paciencia ya que,
sobre todo al principio, no resultará del todo fácil recolectar el semen en
buenas condiciones. Pero como todo en cualquier actividad de la vida,
necesitaremos coger práctica y adquirir experiencia.
RECOLECCIÓN DEL SEMEN
La recolección de
semen del macho de canario, si este no está excitado, resulta una operación muy
complicada. De hecho, bajo mi punto de vista, es la operación más complicada de
todo el proceso de inseminación. Me
refiero a obtener semen con un mínimo de propiedades, para que la inseminación
cuente con algunas posibilidades de éxito. En los múltiples intentos de recolección de
semen que he realizado, si el macho no estaba excitado, el resultado era
siempre negativo. Siempre ocurrían dos cosas o no obtenía nada de semen, o de
obtener algo, siempre espermatozoides muertos junto con restos de heces.
La forma que mejor
me ha funcionado para recolectar el semen del macho es la siguiente:
1.- El macho debe
estar entrado en celo claramente.
2.- No estar con
ninguna hembra en las últimas 24 horas. Aunque este punto no es determinante
para obtener semen, si he observado que la cantidad de líquido seminal aumenta
si el macho no está con la hembra.
3.- Nos acercamos a
la jaula del macho, este se pondrá un poco nervioso, o en alerta, por ver
nuestra presencia muy cercana a su jaula, defecará una o dos veces. Es
importante que defeque antes de extraer el semen, para evitar la contaminación
de este con las heces. En muchas ocasiones los machos también defecan en el paso
posterior estando ya con la hembra, pero si podemos conseguir que lo haga en su
jaula antes de meterlo con la hembra mejor.
4.- Cogemos al
macho y lo metemos con una hembra, en este momento es cuando el macho puede
defecar, pero como no siempre lo hace, es mejor asegurarnos de que lo ha hecho
antes. Esperamos a que el macho le cante a la hembra con intención de cópula, y
en ese momento, lo retiramos para realizar la recolección. No dejaremos que la
cópula se produzca.
5.- Cogemos el
macho, lo ponemos boca abajo, lo sujetamos con una mano, con los dedos índice y
pulgar de la misma mano con la que sujetamos el pájaro, presionamos
lateralmente la cloaca del macho de forma suave. Veremos como brota un líquido
que recogeremos con la pipeta, que sujetamos con la otra mano, por capilaridad,
sin chupar, simplemente dejamos que el líquido siga el camino que le ofrece la
punta de la pipeta. No introducir demasiado la punta de la pipeta, solo un par
de milímetros, debemos pensar que el líquido está alojado debajo del labio
copulador. Este
líquido es el líquido seminal o esperma, si hemos hecho bien el proceso debería
brotar limpio, sin heces u orina. El color del líquido recolectado, el esperma,
varía en función de la concentración de espermatozoides presente en él, desde
transparente, a color canela o pardo.
La recolección
ideal sería un líquido seminal de color canela, con espermatozoides de gran
actividad o movimiento.
No siempre se puede
conseguir la excitación máxima del macho en el momento preciso que tenemos
programada la inseminación. Los canarios no dejan de ser seres vivos y como
tales, tienen estados de ánimo que varían según las circunstancias.
Aunque la mejor
forma que considero, para recolectar el semen, es metiendo el macho con la
hembra unos segundos, sin dejar que copulen, lo hago de forma genérica. Lo que
quiero decir es que, de forma genérica, esa es la que considero mejor. Ahora
bien, los 8 machos con los que trabajado me han demostrado que cada uno tiene
su carácter. De esos 8 machos alguno era muy complicado excitarlo porque se
asustaba fácilmente, otros con solo ver a la hembra se excitaban, incluso había
uno de ellos, que con dejarlo varios días 2 ó 3 días sin contacto visual con la
hembra lo cogías directamente y en la gran mayoría de veces recolectabas una
buena muestra. Resumiendo, que si conocemos bien a los machos, sabremos cuando
será el momento idóneo para la recolección de semen.
Aunque el macho no
se encuentre en su excitación máxima, también podemos recolectar el semen en
cantidad y calidad suficientes para realizar la inseminación con posibilidades
de éxito.
Sobre el
procedimiento que considero ideal para la recolección de semen, podemos
realizar variantes que, aunque han sido menos efectivas en cuanto a
cantidad de semen, los resultados han
sido aceptables.
Estas variantes
pueden ser:
- Que no hayan
pasado 24 desde que el macho ha estado con una hembra.
- Que el macho no
llegue a cantar cuando lo metemos con una hembra.
- Que no metamos el
macho con la hembra pero por el mero hecho de tener contacto visual o auditivo
la excitación puede ser suficiente para obtener algo de semen.
Como he dicho
anteriormente, podemos obtener semen en estas circunstancias, pero las
probabilidades de obtenerlo en buenas condiciones son menores.
Como dice el refrán
vale más una imagen que mil palabras, en el siguiente vídeo muestro como
realizo la recolección de semen paso a paso.
EL SEMEN
Una vez recolectado
el semen del macho, debemos asegurarnos de que el semen obtenido es de buena
calidad. Para ello debemos valorar 3 parámetros:
- Volumen de
líquido seminal.
- La cantidad de
espermatozoides.
- La movilidad de
los espermatozoides.
En las recolecciones de semen que he realizado
el volumen medio recogido esta entre 0,02 ml y 0,04 ml.
Una forma de ver la
concentración de espermatozoides en el líquido seminal es bajo el microscopio,
donde veremos los espermatozoides y su concentración.
El número de espermatozoides por recolección, mejor dicho la concentración de espermatozoides por muestra, me fue imposible de cuantificar, porque no era capaz de contar los espermatozoides en la cámara de Neubauer, bajo el microscopio. La concentración de espermatozoides es tan alta, que no soy capaz de distinguir los individuos correctamente, ni para llegar a una cifra aproximada.
Podría diluir la
muestra en un porcentaje conocido bajo el microscopio en la cámara de Neubauer,
contar los espermatozoides y multiplicarlo por el porcentaje conocido de
dilución, pero es algo que no he realizado.
Pero si tengo una
forma de saber si una recolección de semen posee un número abundante de espermatozoides o no, por
su color a simple vista. El líquido seminal de un canario en la pipeta de
recolección, adquiere varias tonalidades en función de la concentración de
espermatozoides, que va desde el color transparente al color pardo o canela,
incluso distintas tonalidades de color pardo dentro del mismo líquido seminal. Las
zonas de color pardo señalan las zonas de mayor concentración de
espermatozoides.
Si el líquido es
transparente, como si fuese agua, significa que la concentración de
espermatozoides es baja. Si el líquido seminal adquiere un color canela, la
concentración de espermatozoides es alta. Incluso dentro de una misma muestra
recolectada, podemos ver partes con tonalidades canela y otras más
transparentes. Los espermatozoides son microscópicos y no podemos verlos a
simple vista, pero cuando están muy juntos, en un número grande de individuos,
podemos apreciar los grupos que forman en forma de color canela o pardo.
Una muestra vista a
con el ojo humano de color canela adquiere la visión bajo el microscopio como
muestra la imagen
12. La muestra al ojo
humano de color transparente se ve bajo el microscopio como vemos en la imagen 13.
Si el líquido es
blanco como la leche, o muy oscuro, no habrá dudas, son heces.
Para conocer bien
las recolecciones, recomiendo observarlas al microscopio para que uno pueda
familiarizarse con ellas.
Para ver la
movilidad de los espermatozoides, no me ha quedado más remedio que hacerlo bajo
el microscopio. Con un microscopio, de 160 a 640 aumentos, se puede ver
perfectamente los espermatozoides de forma muy clara. Para observar la
movilidad debemos enfocar la lente a zonas donde la concentración de
espermatozoide no sea muy alta, ya que si enfocamos la lente hacia zonas muy
masificadas de espermatozoides no veremos apenas movimiento. La razón es que
están tan apelotonados que no tienen margen de maniobra en el porta muestras.
EL ESPERMATOZOIDE
Los datos e imágenes sobre los espermatozoides que mostraré a continuación corresponden a canarios de Canto Español Discontinuo, y aunque no he observado espermatozoides de otra raza de canarios, intuyo que compartirán las mismas características.
TamañoEl tamaño
aproximado de un espermatozoide es el siguiente:
Cabeza 16 micras
Flagelo 194 micras
Total 210 micras
El flagelo es unas 12
veces más largo que la cabeza
Para el
canaricultor estas cifras serán suficientes para hacerse una idea de del tamaño
de un espermatozoide, para un científico seguramente no sean todo lo rigurosas
que deberían, por eso quiero hacer hincapié en que estas cifras son aproximadas.
No obstante en la imagen 9 podemos ver
un espermatozoide con una referencia métrica para que cada uno pueda hacer su
propia medida.
FormaEn el
espermatozoide se distinguen dos partes, la cabeza y el flagelo.
La cabeza tiene forma helicoidal, se asemeja a
la punta de un sacacorchos.
El flagelo tiene
forma longitudinal, se asemeja a un pelo liso o un látigo.
MovimientoLos movimientos que realiza el espermatozoide son dos. Uno de los movimientos es rectilíneo, aunque no sea una recta perfecta, y hacia delante. Podemos denominar a este movimiento, movimiento de desplazamiento. El otro movimiento que realiza es un movimiento helicoidal, girando sobre sí mismo, emulando al giro de una broca de un taladro. Con este movimiento, consigue la impulsión necesaria para moverse hacia delante. Con el giro sobre sí mismo, consigue el mismo efecto que una hélice de un barco cuando gira, consigue fuerza de impulsión. Podemos denominar a este movimiento, movimiento de impulsión. Si nos fijamos en el video podemos observar perfectamente los dos movimientos.
INSEMINACIÓN DE LA HEMBRA
Para la
inseminación de la hembra he realizado siempre el mismo método pero con tres
variantes. La razón de realizar variantes era hacer pruebas, para encontrar la
mejor opción de inseminación, en términos de efectividad. La efectividad la
mido en número de huevos fecundados en cada postura.
Primeramente he
intentado localizar el oviducto, en el interior de la hembra, para introducir
el semen por él, pero al ser un animal tan pequeño no he encontrado endoscopios
económicos que me pudiesen ayudar. Pero por lo que intuyo tras las
exploraciones realizadas con un endoscopio casero, me da la impresión de que el
oviducto aumenta de tamaño cuando la hembra está en celo. Es decir, que el
conducto del oviducto es de mayor tamaño en la hembra que el intestino grueso,
bueno, al menos esa es mi impresión, sin tener la seguridad total de que es así
realmente.
En la Tabla 1 podemos ver el resumen de todas las
inseminaciones realizadas en la temporada de cría 2015, sin hacer distinción de
las variantes utilizadas. En esta tabla están contabilizadas todas las inseminaciones,
incluidas las de pruebas en busca de mejoras de efectividad.
Método generalUtilizando esa
impresión, el proceso general para inseminar a la hembra es el siguiente:
Por supuesto la
hembra debe estar bien encelada y preparada para poner huevos.
Lo siguiente es
asegurarse de que la cloaca-vagina está limpia de heces. Si podemos hacer
defecar a la hembra antes de la inseminación, mucho mejor, así evitaremos que
defeque durante el proceso de inseminación.
Cogemos la hembra
boca abajo con una mano, presionamos lateralmente y suavemente la cloaca-vagina
de la hembra, con los dedos índice y pulgar de la misma mano con la que sujetamos
a la hembra, para sacar al exterior una pequeña parte de la vagina. Una vez que
se muestre exteriormente, con la pipeta en la otra mano, dejo caer la gota de
esperma, dejo de presionar con los dedos
índice y pulgar para que la vagina se retraiga y vuelva a posición normal. A
continuación soplo un par de veces sobre la vagina con la propia pipeta, sin
introducir aire en ella, para obligar a la hembra a realizar un par de
contracciones. El motivo de que la obligue a realizar estas contracciones es para que el semen se vaya hacia el interior
del oviducto y evitar que la hembra lo expulse. Ver video.
En ningún momento
he introducido ningún objeto en el interior de la hembra.
Variante 1Llamaré variante 1 al siguiente proceso, que podemos denominar prepostura. Siguiendo el método general, realizo la inseminación directamente. Es decir, una vez que extraigo el semen y compruebo su calidad, insemino a la hembra con ese semen, a los pocos minutos de la recolección, 2 ó 3 minutos máximo. La inseminación tiene lugar los días en los que la hembra está construyendo el nido. Como fecha límite para la inseminación, tomo un día antes de que la hembra ponga el primer huevo. Los mejores resultados los he tenido inseminando entre 4 y 2 días antes de que la hembra ponga el primer huevo. Ver tabla 2. En las 2 últimas posturas con inseminación por esta variante, he marcado los huevos según su orden en la postura (hembras 48R y N4). El huevo fecundado de 48R fue el 3º según orden de postura, y de N4 fueron el 2º y 3º según su orden de postura.
En algunas de estas inseminaciones, he inseminado a la
hembra, de plumaje verde, con semen de 3 machos diferentes en distintos días
previos a la postura. Los 3 machos tenían características hereditarias
diferenciables. Uno con plumaje amarillo, otro con plumaje gris y el tercero
con moña. La intención de esta prueba era ver con que fenotipo salían de los
pichones, si alguno heredaba una característica marcada del padre, sabría cuál
de las inseminaciones resultó ser la buena. Todos los pichones fueron verdes y
sin moña, por lo que no he podido sacar conclusiones. Necesitarían una prueba
de ADN, pero eso ya son palabras mayores, económicamente hablando, solo para
averiguar este punto.
Variante 2Llamaré variante 2 al proceso de dilución del semen. Como compruebo la calidad del semen en cada inseminación, parte del semen recolectado lo necesito para meterlo en el porta muestras y verlo bajo el microscopio, por lo que se reduce la cantidad de líquido seminal. La intención de diluir el semen es conseguir una mayor cantidad de líquido seminal, sabiendo que el número de espermatozoides de la muestra será el mismo. Lo que perseguí con esta variante era aumentar el líquido seminal para que los espermatozoides tuviesen más fluido en el que desplazarse por el oviducto y conseguir una mayor efectividad en la fecundación. Como no soy científico, no tengo mucha idea de cómo diluir semen. Muy probablemente esa es la razón por la que no ha funcionado correctamente, en cuanto a fecundación de los huevos. El proceso de dilución de semen es bastante complicado porque hay que tener varios factores en cuanta, pero principalmente hay que tener en cuenta el diluyente a utilizar y la temperatura de dilución. El diluyente que he utilizado es agua de coco al natural (muy económico), utilizado en inseminación de gallinas con un porcentaje de efectividad muy similar al diluyente comercial IMV (producto poco económico). El diluyente debe tener las propiedades de suministrar nutrientes a los espermatozoides y no matarlos. La temperatura de dilución también la hay que tener en cuenta, porque aunque se utilice un diluyente adecuado, el choque térmico, si la temperatura no es adecuada, puede matar a los espermatozoides. El razonamiento que he utilizado para la dilución es que no
hubiese mucha diferencia de temperatura entre semen y el diluyente a la hora de
la mezcla. Para ello, mantenía una pipeta con agua de coco pegado a mi cuerpo
para conseguir alrededor de
Variante 3Según he podido ver, en algunos documentos en la inseminación artificial de halcones, los criadores esperan a que la hembra ponga el primer huevo y antes de que transcurran 2 horas desde la puesta de ese primer huevo inseminan a la hembra. Con ello se aseguran fecundar el resto de los huevos que ponga la hembra. Pues apoyándome en este argumento de la inseminación de halcones he probado a ver el resultado. Para ello he seguido el proceso del método general, pero en lugar de inseminar unos días antes de poner el primer huevo, he esperado a que la hembra pusiese el primer huevo, y antes de las 2 horas siguientes a la postura del huevo, inseminé a la hembra. El resultado tampoco ha sido bueno, aunque solo lo he realizado en una ocasión y quizá no sea suficiente para valorar el resultado adecuadamente. Ver resultado en la tabla 4.
CONCLUSIÓN
La inseminación artificial en canarios es posible, hay que ser riguroso en seguir algunas pautas pero se puede conseguir relativamente fácil. Espero que con este documento les resulte más fácil a los criadores que, en un futuro, quieran intentarlo. El porcentaje de efectividad es bajo comparado con la inseminación natural que supone la cópula de la pareja, pero estoy convencido de que los porcentajes de efectividad de la inseminación artificial se pueden mejorar. Desde mi experiencia la clave está en lograr introducir todo el esperma recolectado en el oviducto de la hembra. Cuando logremos introducir todo el semen recolectado al macho en el oviducto de la hembra, sin hacerle daño, los porcentajes de efectividad subirán considerablemente.
No todos los huevos fecundados artificialmente se convirtieron en canarios adultos, pero no he observado una mortalidad diferente en pichones o embriones conseguidos artificialmente, con respecto a los embriones o pichones conseguidos por cópula natural de la pareja de canarios. Como he dicho anteriormente, los porcentajes de efectividad, en la inseminación artificial, no son muy altos, pero si un canaricultor se empeña en sacar una nidada por inseminación artificial, lo puede hacer perfectamente.
OTRAS IMÁGENES
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